Caracterização bioquímica de shp2 wt e mutantes da síndrome de noonan e sua interação com chaperonas (2025)
- Authors:
- Autor USP: VAL, GIOVANNA SAAD - FCF
- Unidade: FCF
- Subjects: SÍNDROME DE NOONAN; BIOQUÍMICA
- Keywords: SHP2; Chaperonas
- Language: Português
- Abstract: INTRODUÇÃO: A tirosina fosfatase SHP2 é importante em vias de sinalização relacionadas ao desenvolvimento. A SHP2 possui um mecanismo de autoinibição devido a interação entre seus domínios N-SH2 e PTP. Mutações missense no gene codificador de SHP2 (PTPN11) são encontradas em cerca de 50% dos pacientes portadores da Síndrome de Noonan, uma desordem genética sem cura associada com fenótipos variáveis, incluindo baixa estatura, dimorfismo facial e cardiopatia. As mutações missense desestabilizam o mecanismo de autoinibição, promovendo um ganho de função fosfatase. Ademais, estudos demonstram que mutantes de SHP2 são mais sensíveis a inativação por oxidação, e mais resistentes a reativação, sugerindo sua inativação irreversível e disponibilidade para degradação. As proteínas chaperonas como Hsc70, Hsp70 e BIP, membros da família de proteínas de choque térmico de 70 kDa, têm papel no controle da homeostase proteica, participando do enovelamento, translocação e controle de degradação de proteínas. Entretanto, a interação das chaperonas com SHP2 não está totalmente elucidada. OBJETIVO: O objetivo deste trabalho é analisar a interação in vitro entre SHP2 WT ou mutantes reportadas na Síndrome de Noonan (T73I, E139D e P491H) com as chaperonas Hsp70, Hsc70 e BIP. E adicionalmente, analisar a atividade fosfatase e a regulação por oxidante comparativas entre SHP2 WT e suas três mutantes. MATERIAL E MÉTODOS: as proteínas expressas e purificadas foram caracterizadas por dicroísmo circular. A interação SHP2-chaperonas foi analisada através de ensaios pull-down ou SEC-MALS e complementada com a simulação de complexos de interação no Alphafold 3, com posterior análise no Pymol. Os ensaios de atividade fosfatase e sua inibição por oxidação utilizaram o pNPP como substrato. Os resultados foram interpretados com os sprogramas estatísticos Sigma Plot e PrismGraphPad. RESULTADOS: As proteínas foram expressas e purificadas com sucesso. Hsp70 e Hsc70 possuem estrutura predominante de alfa-hélices, já SHP2 apresenta um misto de folhas-beta e alfa-hélice. A estabilidade térmica das proteínas chaperonas é consideravelmente maior que de SHP2, porém, o domínio NBD de Hsp70 é mais sensível a desnaturação térmica. Em comparação a SHP2 WT, suas três mutantes apresentam pequena variação de estabilidade térmica, sendo mais marcante para T73I. A interação SHP2-chaperona foi confirmada por ensaios pull-down e SECMALS. As mutantes de SHP2 se mostram mais ativas e mais resistentes a oxidação em comparação a SHP2 WT. CONCLUSÃO: As proteínas obtidas estavam em sua forma ativa e estruturada. A interação SHP2 (WT e mutantes) - chaperona (inteira e domínios) ocorre com as proteínas monoméricas e é independente da presença de nucleotídeo. Entretanto, as análises por docking molecular apresentaram parâmetros ipTM e pTM de baixa confiabilidade, sendo necessários mais estudos para a definição da região de interação entre SHP2 e chaperonas Hsp70, Hsc70 e BIP. Em comparação a SHP2 WT, P491H demonstrou maior atividade fosfatase, enquanto T73I foi a mais resistente à oxidação. A atividade fosfatase foi altamente influenciada pelas condições de armazenamento e presença do tag de histidina
- Imprenta:
-
ABNT
VAL, Giovanna Saad. Caracterização bioquímica de shp2 wt e mutantes da síndrome de noonan e sua interação com chaperonas. 2025. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação) – Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2025. Disponível em: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/31dd25b0-4161-4045-bd15-c81e59b030cf/TCC_Giovanna_Saad_Val.pdf. Acesso em: 22 jan. 2026. -
APA
Val, G. S. (2025). Caracterização bioquímica de shp2 wt e mutantes da síndrome de noonan e sua interação com chaperonas (Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação). Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/31dd25b0-4161-4045-bd15-c81e59b030cf/TCC_Giovanna_Saad_Val.pdf -
NLM
Val GS. Caracterização bioquímica de shp2 wt e mutantes da síndrome de noonan e sua interação com chaperonas [Internet]. 2025 ;[citado 2026 jan. 22 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/31dd25b0-4161-4045-bd15-c81e59b030cf/TCC_Giovanna_Saad_Val.pdf -
Vancouver
Val GS. Caracterização bioquímica de shp2 wt e mutantes da síndrome de noonan e sua interação com chaperonas [Internet]. 2025 ;[citado 2026 jan. 22 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/31dd25b0-4161-4045-bd15-c81e59b030cf/TCC_Giovanna_Saad_Val.pdf
Download do texto completo
| Tipo | Nome | Link | |
|---|---|---|---|
 |
TCC_Giovanna_Saad_Val.pdf | Direct link |
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
