Expressão e caracterização de histonas de Trypanosoma cruzi (2024)
- Authors:
- Autor USP: CASTRO, BEATRIZ SOUZA - IFSC
- Unidade: IFSC
- DOI: 10.11606/003239484
- Subjects: TRYPANOSOMA CRUZI; PROTEÍNAS
- Language: Português
- Abstract: A Doença de Chagas, causada pelo parasita Trypanosoma cruzi, persiste afetando milhões de pessoas globalmente, sem disponibilidade de vacinas ou tratamentos adequados para sua fase crônica. A infectividade do parasita e os processos que permitem sua sobrevivência em diferentes hospedeiros envolvem regulação da expressão gênica, principalmente de forma pós-transcricional. Evidências recentes sugerem que mecanismos epigenéticos desempenham um papel crucial em sua patogenicidade, tornando-os alvos apropriados para o desenvolvimento de novas drogas através do estudo estrutural da cromatina. O nível mais básico de empacotamento da cromatina é o nucleossomo, composto pelo DNA interagindo ao redor de complexos proteicos octaméricos que possuem um par de cada uma das histonas - H2A, H2B, H3 e H4. Os nucleossomos formam uma estrutura de “colar de contas”, com regiões de DNA espaçador (linker DNA) conectando cada unidade. A histona H1 se associa a esse DNA linker, estabilizando nucleossomos adjacentes, de forma a induzir o próximo nível de empacotamento: a fibra de 30 nm. Este estudo buscou, através de expressão recombinante e diferentes técnicas de purificação, realizar a caracterização bioquímica das histonas H2A, H2B, H3, H4 e H1 de Trypanosoma cruzi. As histonas H2A, H2B, H3 e H4 apresentaram uma expressão eficiente a 37°C em Escherichia coli cepa T7 Express em meio 2xYT. O protocolo de purificação utilizado contou com técnicas de reenvelamento, cromatografia de afinidade a metal quelado e cromatografia de exclusão molecular. Este protocolo foi bem sucedido, resultando na obtenção dos dímeros puros de TcH2A/TcH2B e TcH3/TcH4. Os dados obtidos após diversos testes de expressão da TcH1, entretanto, não se mostraram satisfatórios. Apesar do processo de purificação por troca iônica proposto para essa proteína se mostrar promissor, é evidente a necessidade dabusca de métodos de expressão mais eficazes. Por fim, é possível concluir que os resultados endossam a necessidade de continuação do estudo, visando a obtenção da estrutura e a caracterização do complexo nucleossômico de T. cruzi. O projeto tem como perspectivas futuras examinar as histonas utilizando técnicas como Crio-Microscopia Eletrônica (Cryo-EM) e Cryo-Soft X-Ray Tomography (Cryo-SXT), além de estudar as propriedades cinéticas e termodinâmicas da montagem dos nucleossomos e a sua interação com o DNA por técnicas de anisotropia de fluorescência.
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2024
- Este periódico é de acesso aberto
- Este artigo NÃO é de acesso aberto
-
ABNT
CASTRO, Beatriz Souza. Expressão e caracterização de histonas de Trypanosoma cruzi. 2024. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação) – Instituto de Física de São Carlos, Universidade de São Paulo, São Carlos, 2024. Disponível em: https://doi.org/10.11606/003239484. Acesso em: 21 fev. 2026. -
APA
Castro, B. S. (2024). Expressão e caracterização de histonas de Trypanosoma cruzi (Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação). Instituto de Física de São Carlos, Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de https://doi.org/10.11606/003239484 -
NLM
Castro BS. Expressão e caracterização de histonas de Trypanosoma cruzi [Internet]. 2024 ;[citado 2026 fev. 21 ] Available from: https://doi.org/10.11606/003239484 -
Vancouver
Castro BS. Expressão e caracterização de histonas de Trypanosoma cruzi [Internet]. 2024 ;[citado 2026 fev. 21 ] Available from: https://doi.org/10.11606/003239484
Informações sobre o DOI: 10.11606/003239484 (Fonte: oaDOI API)
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