Proteína RUVB-LIKE 1: a potencial metilação de argininas e sua relevância biológica em Leishmania braziliensis (2022)
- Authors:
- Autor USP: SILVA, MARIANA LOTERIO - FMRP
- Unidade: FMRP
- Subjects: METILAÇÃO; ARGININA; EXPRESSÃO GÊNICA; LEISHMANIA BRASILIENSIS
- Keywords: RuvB-Like1; Arginina metiltransferases; Modificação pós-traducional; Regulação da expressão gênica
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: As leishmanioses são um conjunto de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania e que afetam cerca de um milhão de pessoas por ano, segundo dados da Organização Mundial da Saúde (WHO, 2021). Do ponto de vista molecular, estes parasitas apresentam particularidades em relação a regulação da expressão gênica, que ocorre majoritariamente em nível póstranscricional; seus genes estão organizados em unidades policistrônicas, e não têm promotores canônicos que dirijam individualmente sua transcrição. Assim, a transcrição origina uma molécula de pré-mRNA que é processada por transsplicing, gerando mRNAs maduros, os quais podem ser alvos de Proteínas Ligantes de RNAs (RBPs, do inglês RNA Binding Proteins), que são capazes de alterar características como a estabilidade, distribuição celular ou iniciação da tradução deste mRNA. A interação das RBPs com o RNA depende de diferentes fatores, como modificações pós-traducionais (PTM), entre elas, a metilação de argininas promovida por PRMTs (proteínas arginina metiltransferases). Em trabalhos anteriores do laboratório, a proteína RuvB-Like1 foi identificada como potencial alvo da enzima PRMT5 de Leishmania braziliensis. A RuvB-Like1 pertence à família AAA+, e pode estar envolvida em reparo de DNA, transcrição, remodelação da cromatina e apoptose. Esta proteína é conservada desde leveduras até humanos e é caracterizada pela presença de motifs responsáveis pela ligação e hidrólise de ATP. Assim, nosso objetivo foi caracterizar RuvB-Like 1 de L. braziliensis (LbRuvB) e o efeito da potencial metilação de arginina sobre a proteína. Nossos resultados incluíram o alinhamento da proteína LbrRuvB com a de outros organismos com a demonstração de alta conservação de seus motifs. Uma análise de modelagem molecular utilizando a RuvB-Like1 humana para comparação, revelou algumas diferenças e estruturais, apesar da conservação dos motifs. O sistemaCRISPR/Cas9 foi utilizado para adição da etiqueta myc na porção N-terminal da LbRuvB (mycRuvB+/+) e para obtenção do nocaute de LbrPRMT5 (mycRuvB+/+PRMT5KO). Estas ferramentas foram utilizadas para a caracterização parcial de LbrRuvB; nas condições avaliadas não observamos efeitos fenotípicos ou alterações de distribuição da proteína RuvB-Like1 na ausência de PRMT5. Foi possível demonstrar por ensaios de RT-qPCR que os 8 níveis de transcrito da LbrRuvB são mais altos em amastigotas axênicos do que nas formas procíclicas e metacílicas, enquanto o ensaio de western blot empregando anticorpo anti-myc demonstrou que a proteína tem o tamanho predito (~50kDa) e é expressa nas três principais fases do ciclo de vida do parasito de maneira semelhante, independente da presença de LbrPRMT5. Os resultados da microscopia de imunofluorescência revelaram que a LbrRuvB se encontra no núcleo, mas também no citoplasma de forma semelhante nos dois backgrounds genéticos. Além disso, a LrbPRMT5 foi co-imunoprecipitada com a LbrRuvB no ensaio imunoprecipitação, que também resgatou proteínas que participam de processos nos quais RuvB está implicada em outros organismos. Em conjunto, os dados ajudaram a elucidar algumas das características da LbrRuvB e demonstraram que LrbPRMT5 não tem impacto mensurável em sua expressão ou localização intracelular. Nossos achados têm duas interpretações possíveis; ou a LbrRuvB não sofre metilação pela ação de LbPRMT5, ou esta não ocorre nas condições e parâmetros analisados
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2022
-
ABNT
SILVA, Mariana Loterio. Proteína RUVB-LIKE 1: a potencial metilação de argininas e sua relevância biológica em Leishmania braziliensis. 2022. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação) – Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2022. Disponível em: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/1c0471c2-3c9c-41d2-a5f1-0d61c39113d9/MARIANA_LOTERIO_SILVA_PROTE%C3%8DNA_RUVB-LIKE_1_A_POTENCIAL_METILA%C3%87%C3%83O_DE_ARGININAS_E_SUA_RELEV%C3%82NCIA_BIOL%C3%93GICA_EM_.pdf. Acesso em: 23 mar. 2025. -
APA
Silva, M. L. (2022). Proteína RUVB-LIKE 1: a potencial metilação de argininas e sua relevância biológica em Leishmania braziliensis (Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação). Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/1c0471c2-3c9c-41d2-a5f1-0d61c39113d9/MARIANA_LOTERIO_SILVA_PROTE%C3%8DNA_RUVB-LIKE_1_A_POTENCIAL_METILA%C3%87%C3%83O_DE_ARGININAS_E_SUA_RELEV%C3%82NCIA_BIOL%C3%93GICA_EM_.pdf -
NLM
Silva ML. Proteína RUVB-LIKE 1: a potencial metilação de argininas e sua relevância biológica em Leishmania braziliensis [Internet]. 2022 ;[citado 2025 mar. 23 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/1c0471c2-3c9c-41d2-a5f1-0d61c39113d9/MARIANA_LOTERIO_SILVA_PROTE%C3%8DNA_RUVB-LIKE_1_A_POTENCIAL_METILA%C3%87%C3%83O_DE_ARGININAS_E_SUA_RELEV%C3%82NCIA_BIOL%C3%93GICA_EM_.pdf -
Vancouver
Silva ML. Proteína RUVB-LIKE 1: a potencial metilação de argininas e sua relevância biológica em Leishmania braziliensis [Internet]. 2022 ;[citado 2025 mar. 23 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/1c0471c2-3c9c-41d2-a5f1-0d61c39113d9/MARIANA_LOTERIO_SILVA_PROTE%C3%8DNA_RUVB-LIKE_1_A_POTENCIAL_METILA%C3%87%C3%83O_DE_ARGININAS_E_SUA_RELEV%C3%82NCIA_BIOL%C3%93GICA_EM_.pdf
Download do texto completo
| Tipo | Nome | Link | |
|---|---|---|---|
 |
MARIANA_LOTERIO_SILVA_PRO... | Direct link |
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
