Clonagem, expressão e purificação de monooxigenases líticas de polissacarídeos (LPMOs) e sua aplicação em biorrefinarias ()
- Authors:
- Autor USP: SOARES, LUCAS MATEUS - EEL
- Unidade: EEL
- Subjects: ASPERGILLUS; CLONAGEM; LIGASES
- Language: Português
- Abstract: Este estudo visa à clonagem, expressão e purificação de enzimas LPMOs. Genes provenientes do organismo Aspergillus niveus foram clonados no vetor pEXPYR, propagados em Escherichia coli TOP 10 e transformados em Aspergillus nidulans linhagem A773. O estudo tem por objetivo final a expressão das proteínas estudadas e subsequente caracterização bioquímica destas. A aplicação da técnica de eletroforese em gel de agarose 1% (m/v) evidenciou a tentativa bem sucedida da amplificação inicial dos genes pretendidos. À semelhança dos genes, também se obteve resultado satisfatório na amplificação do vetor pEXPYR, na montagem de construtores de expressão utilizando o sistema de Clonagem Independente de Ligase (LIC), na transformação em E. coli, e, por fim, na transformação em A. nidulans. Após inóculo em meio líquido suplementado de maltose 5% por 48 horas e posterior concentração, constatou-se a expressão das LPMOs desejadas. Amostras provenientes de diferentes escalas e cultivos foram concentradas. O cultivo em menor escala forneceu resultados preliminares de atividade em PASC e Avicel®, ao passo que o de maior escala passou por sucessivos métodos de purificação. Os testes de atividade com a enzima purificada, todavia, não foi possível. Somou-se a esse estudo a análise da viabilidade da aplicação das LPMOs em processos de biorrefinarias, bem como suas condições ótimas de atuação em substratos celulósicos e lignocelulósicos, além da discussão acerca dos resultados obtidos em testes laboratoriais à luz da literatura utilizada.
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- Publisher place: Lorena
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ABNT
SOARES, Lucas Mateus. Clonagem, expressão e purificação de monooxigenases líticas de polissacarídeos (LPMOs) e sua aplicação em biorrefinarias. [S.d.]. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação) – Escola de Engenharia de Lorena, Universidade de São Paulo, Lorena, [S.d.]. Disponível em: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/cd52cc12-4377-471c-b7a2-a21efdcb8125/Soares__Lucas_Mateus.pdf. Acesso em: 15 mar. 2025. -
APA
Soares, L. M. Clonagem, expressão e purificação de monooxigenases líticas de polissacarídeos (LPMOs) e sua aplicação em biorrefinarias (Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação). Escola de Engenharia de Lorena, Universidade de São Paulo, Lorena. Recuperado de https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/cd52cc12-4377-471c-b7a2-a21efdcb8125/Soares__Lucas_Mateus.pdf -
NLM
Soares LM. Clonagem, expressão e purificação de monooxigenases líticas de polissacarídeos (LPMOs) e sua aplicação em biorrefinarias [Internet]. [citado 2025 mar. 15 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/cd52cc12-4377-471c-b7a2-a21efdcb8125/Soares__Lucas_Mateus.pdf -
Vancouver
Soares LM. Clonagem, expressão e purificação de monooxigenases líticas de polissacarídeos (LPMOs) e sua aplicação em biorrefinarias [Internet]. [citado 2025 mar. 15 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/cd52cc12-4377-471c-b7a2-a21efdcb8125/Soares__Lucas_Mateus.pdf
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