Catalase PEGuilada como potencial biofármaco para tratamento do vitiligo (2020)
- Authors:
- USP affiliated author: ROCHA, BEATRIZ DE MENDONÇA - FCF
- School: FCF
- Subjects: CATALASE; VITILIGO
- Language: Português
- Abstract: INTRODUÇÃO: A catalase (CAT) está envolvida na decomposição do peróxido de hidrogênio. Recentemente, ela foi sugerida como potencial biofármaco para o tratamento do vitiligo, visto que pacientes acometidos têm concentrações menores desta enzima na epiderme, além de acumularem radicais livres capazes de levar ao estresse oxidativo, como demonstrado na fisiopatologia deste agravo. Por essa razão, o uso tópico da CAT em associação com terapia de raios UV tem sido sugerido como uma nova modalidade de tratamento. Desse modo, investigou-se a PEGuilação da CAT como ferramenta para o desenvolvimento de um potencial biofármaco com maior estabilidade a longo prazo. OBJETIVOS: Desenvolver um protocolo de PEGuilação sítio-específica N-terminal da catalase, realizar estudos de estabilidade em função do tempo e da temperatura e, por fim, verificar a capacidade de prevenção de peroxidação lipídica em amostras de pele irradiadas. MATERIAIS E MÉTODOS: A fim de definir um protocolo reacional ideal, tanto pH da reação quanto tamanho do polímero foram estudados. De maneira geral, soluções de 1 mg/mL de catalase e mPEG-NHS 10 kDa, na proporção de 25:1 (PEG:proteína), em tampão PBS de pH 6,0; 6,5; 7,0; 7,5 e 8,0 foram utilizadas e mantidas por 60 minutos sob agitação a 400 rpm e 22 °C. Para purificação e determinação de rendimentos de reação, cromatografia de exclusão molecular foi utilizada. Estudos de avaliação da estrutura proteica do conjugado enzima-polímero e de estabilidade térmica e ao longo do tempo também foram realizados, além de ensaio in vitro da capacidade de permeação e antioxidante do produto PEGuilado, utilizando tecido de orelha suína em sistema de difusão de Franz e ensaio TBARS. RESULTADOS: Determinou-se a condição de reação ótima com o pH reacional 8,0 e PEG reativo de 20 kDa. Alémdisso, por meio de dicroísmo circular, observou-se que a estrutura secundária da catalase se manteve com a PEGuilação, bem como parâmetros como ponto de fusão, apesar de sofrer leve queda na atividade enzimática em relação à variante nativa. A atividade enzimática da enzima e variantes PEGuiladas foi acompanhada ao longo do tempo em temperatura de geladeira (4°C) e à 37°C e mostraram a capacidade da PEGuilação em conferir proteção à degradação enzimática. Por fim, os ensaios in vitro mostraram a capacidade da enzima PEGuilada de permanecer em camadas mais superficiais da pele, promovendo redução da peroxidação lipídica. CONCLUSÃO: A PEGuilação, além de ser uma ferramenta de grande importância para o melhoramento de moléculas usadas em tratamentos já existentes, é um procedimento com grande potencial no desenvolvimento de um biofármaco para o tratamento para o vitiligo. Os resultados deste estudo são favoráveis à investigação mais profunda da ação da catalase PEGuilada in vitro e, posteriormente, in vivo
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ABNT
ROCHA, Beatriz de Mendonça. Catalase PEGuilada como potencial biofármaco para tratamento do vitiligo. 2020. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação) – Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2020. Disponível em: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/67fa1879-298d-41a6-b637-34ae0a1b2e83/3059886.pdf. Acesso em: 26 abr. 2024. -
APA
Rocha, B. de M. (2020). Catalase PEGuilada como potencial biofármaco para tratamento do vitiligo (Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação). Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/67fa1879-298d-41a6-b637-34ae0a1b2e83/3059886.pdf -
NLM
Rocha B de M. Catalase PEGuilada como potencial biofármaco para tratamento do vitiligo [Internet]. 2020 ;[citado 2024 abr. 26 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/67fa1879-298d-41a6-b637-34ae0a1b2e83/3059886.pdf -
Vancouver
Rocha B de M. Catalase PEGuilada como potencial biofármaco para tratamento do vitiligo [Internet]. 2020 ;[citado 2024 abr. 26 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/67fa1879-298d-41a6-b637-34ae0a1b2e83/3059886.pdf
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